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細胞穩轉株構建技術服務

一、研究背景

穩轉株即穩定表達細胞株，指的是基于某一細胞系構建的持續過表達或干擾某特定基因的細胞系。其相對于瞬時轉染而言，瞬時轉染的外源基因在短時間轉錄翻譯得到的蛋白量少，且在細胞系中過表達或干擾效果的維持時間很短，一般不過1至2周，僅能夠滿足小量蛋白的制備，大量生產成本很高。反觀穩轉株能夠長期過表達或沉默特定基因，從而能更好地對該基因的一系列機制進行解讀，在生物學研究中穩轉株構建具有舉足輕重的意義。

細胞穩轉是通過將外源基因整合至宿主細胞染色體DNA中，建立長期穩定表達目的基因的克隆化細胞系的核心技術。慢病毒感染-藥物篩選法是目前廣泛運用的穩轉株構建方法，具有高效整合，目標細胞廣泛等特點。該技術包含載體構建、質粒合成、慢病毒包裝、細胞轉染、抗性篩選與單克隆分離幾個關鍵階段。相比于瞬時轉染的短期表達特性，穩定轉染建立的細胞系能持續表達目標蛋白超過6個月，廣泛應用于基因功能研究、藥物篩選和大規模蛋白生產領域。實驗過程中需優化抗生素濃度、病毒轉染細胞比例等核心參數，并通過Western blot或流式細胞術驗證基因表達穩定性。

二、技術簡介

逸漠生物采用的包裝系統是二代包裝系統，即三質粒系統，該系統包括1個包裝質粒(psPAX2)、1 個包膜質粒(pMD2.G)、1個目的基因質粒和1株包裝細胞(293T cell)。

逸漠生物采用三質粒共轉染293T細胞。在轉染完成后48-72 h進行病毒收獲（即未純化的細胞上清液），根據不同的試驗需求，確定采用相應的濃縮純化方法得到高濃度的病毒保存液，最后根據嚴格的質量標準測定慢病毒的各項指標。

在一定滴度范圍內的慢病毒顆粒對目的細胞進行轉染，將攜帶靶基因的載體導入細胞，再依據載體所含抗性標志（如真核表達載體常用的新霉素、潮霉素、嘌呤霉素等抗性篩選標志物，實際操作中常用 G418 替代新霉素），通過對應藥物篩選出混合陽性克隆。

三、為什么要做細胞穩轉株構建？

構建細胞穩轉株（穩定表達細胞株）是細胞生物學和分子生物學研究中的重要技術手段，其核心目的是實現外源基因的持續、穩定表達，滿足基礎研究與應用場景的特定需求。

1、基因功能的長期研究

瞬時轉染的局限性：瞬時轉染（如脂質體轉染）雖能短期內表達外源基因，但通常僅維持 2-7 天，無法模擬基因在細胞內的長期效應。例如，研究某腫瘤相關基因對細胞周期的影響時，需觀察數周內的細胞增殖變化，穩轉株可通過持續表達目的基因提供穩定的實驗模型。

慢性表型分析：在神經退行性疾病研究中，需長期觀察淀粉樣蛋白沉積等慢性病理過程，穩轉株可穩定表達致病基因（如突變型 APP 蛋白），為機制研究提供持續穩定的細胞模型。

2、信號通路與基因網絡研究

某些信號通路的激活或抑制需持續刺激（如 Wnt 通路的長期激活），穩轉株可通過穩定表達通路關鍵蛋白（如 β-catenin），避免反復轉染對細胞的損傷，確保通路研究的連續性。

在基因互作研究中，穩轉株可同時穩定表達多個目的基因（如熒光標記蛋白與靶基因），通過熒光追蹤或質譜分析，動態監測蛋白互作網絡的長期變化。

3、工業級穩定生產

單克隆抗體、重組細胞因子（如 IL-2）的生產需細胞系持續表達目標蛋白。例如，CHO（中國倉鼠卵巢細胞）穩轉株經篩選后可高密度培養，每升培養基蛋白產量達克級，滿足藥物研發與商業化生產需求。

成本與效率優化：瞬時轉染需反復操作，且蛋白產量低（通常＜100 mg/L），而穩轉株可通過馴化適應無血清培養基，實現連續灌流培養，降低生產成本。

4、穩轉株 vs. 瞬時轉染：核心優勢對比

四、操作流程

五、服務項目

過表達穩轉株

干擾穩轉株定制

干擾穩轉株三保一

六、服務內容

過表達質粒制備/干擾序列合成

目的基因的慢病毒制備

慢病毒感染目的細胞并進行培養

穩轉混合細胞株進行抗生素篩選

穩轉細胞株進行qPCR檢測和WB檢測

七、服務流程

客戶提供：細胞材料，您可以提供自己的細胞系，也可以從我們的細胞產品中選擇合適的目的細胞，但是該細胞必須能夠保證足夠的可傳代次數。

我們提供：建立穩轉細胞株，以及提供建立方法，步驟及結果。

也可提供基因水平和蛋白水平的驗證：穩轉細胞株可以根據您的要求進行基因水平和蛋白水平的驗證， 包括qPCR檢測、WB檢測和流式檢測等。

周期：4-8 周

報價：詢價

八、公司優勢

團隊擁有成套完善的技術體系，進行穩轉細胞株構建

制備的穩轉細胞株純度高，無污染

提供完整并準確的檢測方案，檢測報告真實可靠

擁有低成本、高效率的制備模式，極大縮短生產周期