1. <td id="5vo3u"></td>
    2. 最近搜索:細胞培養 微生物學 分子生物 生物化學
      首頁>>免疫學>>其他>>Myc tag Nanobody Agarose Beads
      Myc tag Nanobody Agarose Beads
      • 產品貨號:
        BN20548
      • 中文名稱:
        Myc tag Nanobody Agarose Beads
      • 品牌:
        Biorigin
      • 貨號

        產品規格

        售價

        備注

      • BN20548-500ul/25T

        500ul/25T

        ¥2800.00

      • BN20548-1ml/50T

        1ml/50T

        ¥5200.00

      產品描述

      產品描述:偶聯 anti-Myc tag 納米抗體的瓊脂糖珠用于免疫沉淀 Myc tag(EQKLISEEDL)的融合蛋白。 

      產品優勢 

      ? 沒有普通抗體的輕鏈和重鏈; 

      ? 高親和力:解離常數達到 nM-pM 級別; 

      ? 高載量:20ul 的 beads 懸液可以結合 2-5ug Myc tag 的融合蛋白; 

      ? 較短的孵育時間,結合 30-120 min 即可; 

      應用范圍  

           可用于免疫沉淀(IP)/免疫共沉淀(CoIP)、染色質免疫沉淀(ChIP)/RNA 結合蛋白免疫沉淀(RIP)、 酶活性測定、質譜分析等;

      特異性  

           可以結合 Myc tag 的融合蛋白。 

      產品特性 

           存儲緩沖液:PBS(含有 20%乙醇)。 

           保存條件:可在 4℃保存至少 1 個月,在-20 度或-80℃保存 1 年,避免高速離心,干燥和反復凍融。

      實驗原理

      image.png

      實驗步驟: 

           收集細胞: 每個免疫沉淀反應大約使用 106-107 的哺乳動物細胞(約一個 10 厘米培養皿)表達綠色熒光蛋白融合蛋白。吸出生長培 養基、向培養皿中加入 2 毫升預冷的 PBS 洗滌細胞 2 次,利用細胞刮或胰酶消化的方法收集貼壁細胞,細胞轉移到離心 管,500 g 離心 3-5 分鐘并丟棄上清液。 

      細胞裂解: 

           1.用 500 ul 預冷的裂解緩沖液重懸細胞,在裂解緩沖液中加入蛋白酶抑制劑(自備)。對于膜蛋白或核/染色質蛋白, 可使用 RIPA 裂解液(貨號:BN25012)中加入蛋白酶抑制劑(貨號:BN25002)。 

           2.把離心管放置在冰上 30 分鐘,可以每 10 分鐘充分吹打一次。 

           3.細胞裂解產物在 4℃,20,000 g 條件下離心 15 分鐘,轉移裂解產物到一個新的預冷管中,丟棄沉淀。注意:此時細胞 裂解產物可以放在-80℃進行長期儲存。 平衡珠子:

           4.振蕩混勻 Myc tag-Nanobody-Agarose Beads,吸取 20ul beads 懸液到 500 ul 預冷的裂解緩沖液中,在 4 ℃,2,500  g 條件下離心 3 分鐘,丟棄上清液。(此步驟可選)

      結合蛋白  

           5. 將細胞裂解產物加入到平衡的 Myc tag-Nanobody-Agarose Beads 中(如果未做第 4 步,可在細胞裂解產物中直接加入 20ul beads 懸液),在 4 ℃冷柜中的旋轉混合儀上結合 30-120 min。如果需要,保存 50 ul 的裂解產物進行免疫印跡分析。 

           6. 在 4 ℃,2,500 g 條件下離心 3 分鐘,丟棄上清液。

      清洗珠子:  

           7. 用 500 ul 預冷的裂解緩沖液中洗滌 Myc tag-Nanobody-Agarose Beads,在 4 ℃,2,500 g 條件下離心 3 分鐘,丟棄 上清液并重復洗滌 2 次。(可選:在第二次洗滌的步驟中增加鹽濃度到 500 mM)。 

      洗脫蛋白: 

      方法一: 

           8. 加入 20ul 2X SDS-sample buffer 重懸 Myc tag-Nanobody-Agarose Beads。在 95℃條件下加熱 10 min,把免疫沉淀 復合物從珠子上游離出來,然后在 4 ℃,2,500 g 條件下離心 3 分鐘收集上清,進行免疫印跡分析。 

      方法二: 

           9. 替代步驟 8 的可選步驟:加入 50ul 0.2 M pH2.5 的甘氨酸洗脫結合的蛋白,建議孵育時間 30 秒,并不斷混勻,隨后離心,轉移上清液到新管中,為了中和酸性的甘氨酸,需添加 5ul 1.0 M Tris(pH10.4)。注意:為了提高洗脫效率可 以重復這一步。 

      方法三: 

           10. 替代步驟 8 或 9 的可選步驟:也可以加入過量的 Myc tag 的多肽進行洗脫。

      產品效果:

      image.png

      人妻久久精品天天中文字幕_一本之道中文字幕东京热_欧美日韩第一区第138页_欧美日韩激情亚洲国产

      1. <td id="5vo3u"></td>